Lee Seo Jin xuất hiện lần đầu tiên vào năm 1999 trong bộ phim truyền hình House Inside the Waves . Sau một vài vai phụ trên TV, anh đã trở nên nổi tiếng nhờ đóng chính bộ phim truyền hình ăn khách Damo năm 2003, sau đó anh tiếp tục đảm nhận vai chính trong bộ phim truyền hình Phoenix năm 2004 và gặt hái được nhiều thành công khác. [1] [2]Năm 2005, Lee Seo Jin lần đầu giành được vai chính trên màn ảnh rộng trong bộ phim bom tấn hành động năm 2005 Shadowless Sword . [3]

Lee Seo Jin tiếp tục thử sức với các dạng nhân vật khác như một ma cà rồng trong sê-ri phim Freeze (2006), một tay xã hội đen trong Lovers (2006), [2] và một kẻ lừa đảo hình sự trong Soul (2009). [4] [5] Nhưng những vai diễn nhân vật lịch sử vẫn đem lại cho anh nhiều thành công vang dội như Vua Jeongjo của triều đại Joseon trong Yi San (2007), [6] và Tướng Gyebaek của Baekje trong Gyebaek (2011). [7] [8]